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洋葱花器官B类MADS-box基因AcPI的克隆及表达分析

李洪有 王婵 李丽林 王永勤 赵瑞 中国农业科学 2012年第23期

摘要:【目的】克隆洋葱花器官B类PI/GLO家族MADS—box基因,分析其序列特征及时空表达模式,为探讨其在洋葱花发育过程中的分子遗传机制奠定基础。【方法】以洋葱花蕾总RNA为模板,根据同源克隆策略设计简并引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得AcPI的全长cDNA序列。用生物信息学方法对其基因序列特征进行分析;利用RT-PCR和Real-timcPCR分析AcPI在花营整个生长过程中的时空表达模式。【结果】克隆获得洋葱AcPI基因(GcnBank登录号:JX679083)的cDNA全长931bp,包含615bp的完整开放阅读框,编码205个氨基酸。蛋白分析表明,AcPI蛋白具有植物MADS-box蛋白典型的MADS和K结构域;与水仙的NTPI、风信子的HoMADS2有78%、75%的相似性,与金鱼草的GLO也有52%的相似性。系统进化树分析表明,AcPI属于B类MADS—box蛋白家族的PI亚家族。RT-PCR表达分析表明,AcPI只在生殖器官花蕾中表达,但主要在花的第一、二、三轮花器官中表达,而在营养组织根、茎和叶中不表达。Real-timePCR进一步分析表明,AcPI在花芽整个生长过程中,在心皮中微弱表达,但表达丰度呈递增趋势;而在外轮被片、内轮被片和雄蕊中强烈表达,其表达丰度除了在外轮被片中呈先增后减的趋势外,在内轮被片和雄蕊中都呈递增趋势。【结论】AcPI在洋葱第一轮花器官中的表达支持了vanTunen提出的修正的ABC模型;但AcPI在洋葱第四轮花器官中也有表达,这表明AcPI除了调控外轮被片、内轮被片和雄蕊发育外,还可能在心皮的形成发育过程中起着重要作用。

关键词:洋葱花器官基因克隆表达分析

单位:沈阳农业大学园艺学院 沈阳110161 北京市农林科学院蔬菜研究中心/农业部华北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室 北京100097 山西大学生命科学学院 太原030005

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