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二斑叶螨乙酰辅酶A羧化酶基因全长cDNA克隆及其生物信息学分析

吕娟娟 王进军 高新菊 沈慧敏 中国农业科学 2013年第08期

摘要:[目的]克隆二斑叶螨(Tetranychusurticae)的乙酰辅酶A羧化酶(AcetYl-CoAcarboxylase,ACCase)基因,对其进行生物信息学分析并研究其在二斑叶螨敏感和抗性品系中的表达量。[方法]利用RT-PCR技术克隆ACCase基因的cDNA全长,采用生物信息学软件分析克隆基因的编码蛋白特性;利用实时荧光定量PCR方法分析ACCase基因在二斑叶螨敏感和抗螺螨酯品系中的表达差异。[结果]ACCase基因(GenBank登录号:JX424763)的开放阅读框长度为7068bp,编码2235个氨基酸,分子量约为266.35kD,理论等电点为6.38,包含典型的生物素羧化酶(biotincarboxylase,BC)、生物素羧基载体蛋白(biotincarboxylcarrierprotein,BCCP)和羧基转移酶(carboxyltransferase,CT)3个结构域。结合其它物种ACCase基因构建系统发育树表明,该基因与体虱(Pediculushumanuscorporis)ACCase基因具有较高的同源性。实时荧光定量PCR结果表明,ACCasc基因在抗螺螨酯品系中的相对表达量较高,与明感品系间存在显著差异。[结论]利用RT—PCR技术在二斑叶螨中克隆到ACCase基因,ACCase基因的过量表达可能与二斑叶螨对螺螨酯的抗性形成有关,为二斑叶螨的抗性治理提供了依据。

关键词:二斑叶螨螺螨酯accasecdna克隆

单位:甘肃农业大学草业学院/草业生态系统省部共建教育部重点实验室/中-美草地畜牧业可持续发展中心 兰州730070 西南大学植物保护学院昆虫学及害虫控制工程重点实验室 重庆400716

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