摘要：【目的】克隆徐淮山羊硬脂酰辅酶A脱氢酶1（SCD1）基因的cDNA并分析该基因生物信息学功能。通过EGFP融合蛋白在亚细胞水平定位该基因表达产物，研究该基因在异种动物体内表达情况，探索制备异种转基因动物的可能性及外源基因能否稳定遗传。【方法】采用RT-PCR方法从徐淮山羊脂肪组织中克隆SCD1基因cDNA，进行生物信息学分析，并构建含有增强型绿色荧光蛋白（EGFP）报告基因的融合表达载体pEGFP-C1-SCD1，脂质体（LTX）介导基因转染NHI-3T3细胞，48h后荧光倒置显微镜下观察基因表达产物的分布，RT-PCR检测mRNA在体外水平的表达。利用睾丸注射法制备转基因小鼠，在F1代和F2代个体DNA水平和蛋白水平上检测目的基因的表达情况。【结果】成功克隆出徐淮山羊SCD1基因的全序列cDNA，大小为1074bp，编码357个氨基酸，GenBank登录号为JX854036，徐淮山羊SCD1序列与人、褐家鼠、小家鼠、绵羊、牛和野猪相应编码区的同源性分别为86％、83％、82％、98％、95％、90％，氨基酸序列同源性分别为84％、79％、79％、96％、92％、95％；成功构建了融合表达载体pEGFP-C1-SCDl；RT-PCR检测mRNA表达明显；EGFP-SCDl融合蛋白定位在NIT-3T3细胞质中，与在线软件预测一致；通过尾静脉注射和睾丸注射，该基因可以在小鼠体内暂态表达和持续性表达，且可以稳定遗传。【结论】体外克隆的徐淮山羊SCD1基因cDNA在单细胞水平上表达于细胞质中，在小鼠体内也可以表达。

关键词：徐淮山羊 硬脂酰辅酶a脱氢酶 真核表达 荧光蛋白 转基因鼠 

单位：扬州大学动物科学与技术学院 江苏扬州225009