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二斑叶螨内参基因的筛选及解毒酶基因的表达水平

岳秀利 高新菊 王进军 吕娟娟 沈慧敏 中国农业科学 2013年第21期

摘要:【目的】筛选二斑叶螨(Tetranychusurticae)敏感(SS)和抗甲氰菊酯品系(Fe—R)中合适的内参基因,并通过基因相对表达定量PCR研究二斑叶螨抗性品系解毒酶基因表达水平的变化。【方法】采用实时荧光定量PCR(quantitative real timePCR,RT—qPCR)技术,分析二斑叶螨5.8SrRNA、α-tubulin、β-actin、ELF、GAPDH、RPL13a、SDHA和TBP共8个候选内参基因mRNA表达水平的稳定性,并分析二斑叶螨酯酶(Carboxyl/cholinesterases,CCEs)、谷胱甘肽转移酶(Glutathiones—transferase,GSTs)及细胞色素P450单加氧酶(Cytocheome P450 monooxygenases,P450s)等主要解毒酶基因相对表达量。用GeNorm和NormFinder软件进行内参基因稳定性评估,通过比较Ct值的方法进行基因相对表达量计算。【结果】8个内参基因中稳定性最高的为a-tubulin;以α—tubulin为内参基因,二斑叶螨Fe—R品系嬲乃基因TuGSTol、TuGSTdl及P450s基因CYP382相对表达量均显著高于SS品系,而CCEs基因TuCCEl的表达量有所降低。【结论】在二斑叶螨SS和Fe-R品系中α-tubulin为理想的内参基因,RT—qPCR研究表明TuGSTo1、TuGSTd1和CYP3D2相对表达量的升高可能是二斑叶螨对甲氰菊酯产生高抗性的分子机理。

关键词:内参基因ccesgstsp450s二斑叶螨

单位:甘肃农业大学草业学院 兰州730070 西南大学植物保护学院 重庆400716

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