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家蚕整合素基因Bmintegrin αPS3的鉴定及亚细胞定位

谈娟 张奎 徐曼 陈思源 崔红娟 中国农业科学 2013年第22期

摘要:[目的]克隆家蚕整合素基因砌抽tegrincrPS3,分析其mRNA表达及亚细胞定位特征,并进行原核表达及蛋白纯化,为进一步探究Bmintegrin αPS3在家蚕中的功能奠定基础。[方法]利用RACE方法克隆获得Bmintegrin αPS3的eDNA全长序列;采用RT—PCR方法检测BmintegrinαPS3的时空表达;在原核表达系统中表达获得BmintegrinαPS3重组蛋白;并构建BmintegrinαPS3真核表达载体,转染家蚕胚胎细胞系分析其蛋白亚细胞定位。[结果]家蚕整合素基因Braintegrin αPS3编码框全长为2895bp,编码965个氨基酸,含有整合素家族蛋白典型的integrinalpha结构域,预测其为跨膜蛋白。构建了BmintegrinaPS3的原核表达系统,并利用亲和层析纯化获得高纯度的BmintegrinαPS3原核表达蛋白,为进一步制备抗体获得足够的抗原。在家蚕细胞系中外源表达Bmintegrin αPS3蛋白,显示其主要定位于细胞质和细胞膜中。另外,RT—PCR结果显示BmintegrinαPS3mRNA在血细胞中为特异持续表达。[结论]获得了BraintegrinαPS3的完整eDNA序列及表达特征,经原核表达、纯化获得其融合蛋白,在细胞水平上初步分析了其亚细胞定位情况。

关键词:家蚕整合素基因克隆时空表达原核表达亚细胞定位

单位:西南大学家蚕基因组生物学国家重点实验室 重庆400716

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