摘要：【目的】猪源产肠毒素大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）是一类世界范围内流行的致仔猪腹泻的病原菌。依据养猪业生产实践中对致仔猪腹泻病原菌血清学鉴定结果可知，F4ac型ETEC的流行性最为广泛。到目前为止，对ETEC导致仔猪腹泻的机理已经有了比较透彻的阐释。但对ETEC培养液的免疫原性尚未有研究和描述。论文以F4ac型ETEC为研究对象，探索其菌液上清（即培养液）对仔猪小肠上皮细胞（IPEC—J2）的免疫刺激作用。【方法】首先收集Fgac型ETEC菌株2OO培养12h后的培养液，后经4℃，4000r／min，离心15min收集培养液上清，将该上清液经0．22“m滤器过滤，并与DMEM／F12培养基以1：1的比例混合，以此混合液共孵育IPEC—J2细胞3h，重复此处理3次获得处理组细胞；同时设新鲜的LB培养基与DMEM／F12培养基同样以1：1的比例共孵育3h的IPEC—J2细胞为对照组细胞，对照处理亦重复3次。然后用TRIZOL试剂按照说明书提取对照组和攻毒组IPEC-J2细胞的总RNA，并用TaKaRa公司的Prime Script RT reagent Kitwithg DNAEraser（反转录试剂盒）按照说明书将提取的总RNA反转录成eDNA。应用文献报道或自行设计的跨内含子的引物通过实时荧光定量PCR方法，以猪的持家基因β-actin作为内参，检测儿占、TNF-α、CXCL2，IL6．ILIA．TLR4，TLR4．PLAU和MUCl3共9个免疫相关基因和黏蛋白基因在攻毒组和对照组中的mRNA表达差异性。【结果】较之对照组，在攻毒组中，3个重要的促炎细胞因子基因儿汐，mp甜和CXCL2的mRNA均出现了显著性地过表达。其中，在攻毒组中，儿占的表达量为对照组的3．24倍（P〈0．05）；TNF-α的表达量亦为对照组的3．24倍（P〈0．01）；CXCL2的表达量为对照组的1．65倍（P〈0．001）。在攻毒组和对照组之间，其他6个基因（IL6．ILIA，TLR4，SLP，PLAU和MUC13）的表达差异未达到统�

关键词：f4ac型etec 菌液上清 荧光定量pcr 免疫刺激作用 

单位：中国农业大学动物科学技术学院畜禽育种国家工程实验室/农业部畜禽遗传育种重点实验室 北京100193 河北科技师范学院动物科学系 河北昌黎066600