摘要：【目的】顶质体是存在于包括疟原虫和巴贝斯虫在内的顶复门寄生虫的一种细胞器，在病原体中，它主要承载类异戊二烯前体和脂肪酸合成途径，异戊二烯五碳结构是有机体合成多种化合物的结构基础，对有机体生命活动至关重要，例如，在哺乳动物中成为胆固醇和类固醇激素的基本结构，在植物中参与合成类胡萝卜素。且存在于顶质体的类异戊二烯前体合成途径对于病原体的生命活动至关重要且不存在于人类和哺乳动物机体，这使其成为近年来人们研究抗原虫药物的焦点。有学者发现利用特异性阻断类异戊二烯代谢途径的药物可治疗疟疾。1一脱氧一5一磷酸D一木酮糖合成酶（DXS）为该途径中的第一个限速酶。因此，针对牛巴贝斯虫的卜脱氧-5-磷酸D一木酮糖合成酶dxs基因进行克隆和序列分析，并对其进行真核表达和活性检测，以期获得具有活性的卜脱氧-5-磷酸D一木酮糖合成酶，为进行针对该酶的特异性抑制剂的筛选奠定基础。【方法】首先采用反转录PCR技术从牛巴贝斯虫陕县株总RNA中扩增出DXS基因的全长eDNA，并对其进行克隆测序，对测序结果进行序列分析，将阳性克隆亚克隆至带荧光标签的真核表达载体，利用脂质体转染法将重组真核表达质粒转染至Hela细胞，利用倒置荧光显微镜观察转染细胞的表达情况，消化收集转染细胞，通过超声破碎后采用Westernblot技术对DXS蛋白的表达情况进行检测，结合G418压力筛选以及有限稀释的方法对转染阳性细胞进行筛选，获得阳性单克隆细胞。在体外建立DXS酶反应体系，并利用液相质谱联用技术对表达产物的体外活性进行检测。【结果】扩增得到的DXS基因全长共2061bp，共编码686个氨基酸，与GenBank上T2Bo株相应基因相似性达到98．O％。利用生物信息学方法对该蛋白质的二级结构进行分析发现�

关键词：牛巴贝斯 dis 序列分析 真核表达 

单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所/农业部兽用药物创制重点实验室 兰州l730050