摘要：【目的】克隆棉花烟酰胺合成酶基因及其启动子，明确其表达特征，分析其在转基因育种中的应用前景。【方法】根据对一个棉花MaxxaBAC克隆（78LI6）的测序结果，首先从海岛棉品种海7124中PCR扩增获得了棉花烟酰胺合成酶基因GbNocotin的启动子序列，并利用网上数据库PLACE对该序列进行调控元件的预测分析。其次构建该启动子-9GUS连接的重组载体pGbNocotin：：GUS，并通过花浸染法转化拟南芥并获得转基因植株，分别在幼苗期和成熟期对转基因植株进行GUS染色分析。然后通过RT—PCR获得GbNocotin的开放阅读框（ORF）序列，并利用Mega5．0对GbNocotin进行进化树分析，最后利用实时荧光定量PCR（RealTimePCR）对该基因进行组织表达，诱导表达分析。【结果】GbNocotin的启动子区为i．8kb，通过相似性比较预测发现该启动子含有1个专一性Fe缺乏诱导元件IR020S，还含有干旱、重金属、病原物等逆境响应元件以及植物激素响应元件等。对转化pGbNocotin：：GUS拟南芥植株的GUS染色结果表明，在幼苗期GUS基因主要在根部以及下胚轴处表达，而在成熟期除了在根部表达外，还在果荚的基部、花序以及叶柄基部表达。GbNocotin的开放阅读框含有864个核苷酸，编码287个氨基酸，该蛋白等电点为6．76，分子量为32．7kD。虽然在第11—286位氨基酸处具有bIAS保守结构域（PFAMaccessionnumber：PF03059），但是与其他植物来源的该类基因相似性较低，与相似度最高的拟南芥的ATNAS3也仅有43％的相似性。GbNocotin的表达具有器官差异性，在根和茎中的表达最强，其次是棉纤维和花，但是在叶片及胚珠中表达量很低。另外，该基因在缺铁条件下表达量显著上升，在缺铁处理一周后棉花幼根中的表达量较对照增加9倍。而CuSO。、PEG、脱落酸（ABA）以及赤霉素（6A）处理均抑制其表达，但是抑制程度

关键词：棉花 烟酰胺合成酶基因 启动子 器官差异 缺铁诱导 

单位：江苏省农业科学院农业生物技术研究所 南京210014 江苏省农业科学院经济作物研究所 南京210014