摘要：【目的】克隆斜纹夜蛾（Spodoptera litura）多巴脱羧酶（dopa decarboxylase，DDC）基因cDNA全长，研究虫酰肼对表皮形成过程中多巴脱羧酶基因表达的影响。【方法】通过RT-PCR和RACE技术克隆得到斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因的cDNA全长；通过生物信息学工具对斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因的DNA序列及其编码的蛋白质序列进行分析；采用饲料浸毒法测定虫酰肼对斜纹夜蛾不同龄期幼虫的毒力；利用荧光实时定量PCR检测用亚致死剂量虫酰肼处理的斜纹夜蛾幼虫DDC基因的表达水平。【结果】克隆了斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因的cDNA全长，开放阅读框为1263 bp，编码420个氨基酸，5′端非编码区长105 bp，3′端非编码区长79 bp。克隆得到的cDNA全长提交至GenBank，登录号为KF620492。多重序列比对及系统进化树显示斜纹夜蛾DDC基因推导的氨基酸序列与鳞翅目昆虫的DDC序列具有很高的相似性。利用SWISS-MODEL在线工具进行同源建模，成功预测斜纹夜蛾DDC三维结构，其与果蝇属（Drosophila）的多巴脱羧酶空间结构具有很高的相似性，功能结构域具有良好的保守性。测定虫酰肼对斜纹夜蛾3、4、5和6龄幼虫的毒力，其LC50分别为33.32、40.28、71.20和71.97 mg·L^-1。DDC转录表达结果显示，用虫酰肼分别处理12-48 h，4个亚致死剂量（7.50、16.24、28.34和45.63 mg·L^-1）诱导的DDC表达水平均显著高于对照，随着处理时间的延长激活作用呈现出先上升后下降的趋势，其中16.24 mg·L^-1亚致死剂量在24、36和48 h诱导表达水平最高，各处理36 h表达水平最高。处理60 h，4个亚致死剂量的表达水平均显著低于对照。这一结果说明虫酰肼进入虫体后先启动基因表达，而后抑制表达，影响昆虫正常蜕皮。【结论】克隆得到斜纹夜蛾多巴脱羧酶基因cDNA全长，虫酰肼干扰昆虫幼虫蜕皮与其影响表皮形成过程中多巴脱羧酶�

关键词：斜纹夜蛾 虫酰肼 多巴脱羧酶 基因克隆 实时定量pcr 

单位：山东农业大学植物保护学院 山东泰安271018