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小菜蛾三个普通气味受体基因的克隆及表达谱

孔畅仪 王桂荣 刘杨 严善春 中国农业科学 2014年第09期

摘要:【目的】克隆小菜蛾(Plutella xylostella)触角中3个气味受体基因,明确这3个气味受体在不同组织中的表达分布,进而推测这3个基因的功能,为进一步深入研究奠定基础。【方法】通过新一代高通量测序技术对小菜蛾成虫触角进行转录组测序,获得小菜蛾的转录组数据信息,通过对高质量序列的拼接组装、基因鉴定和功能注释,并通过BlaStx基于数据库进行相似性比对分析,预测小菜蛾的气味受体候选基因;设计5I物通过克隆得到3条普通气味受体基因的全长序列,并利用半定量RT—PCR研究其在雌、雄成虫9个不同组织中的表达。【结果】根据预测的基因序列,设计特异引物,克隆得到3条普通气味受体基因的全长序列,分别命名为Pxy10R16,Pxy10R17和Pxy10R18(GenBank登录号分别为KF717601--KF717603)。Pxy10R16开放阅读框全长为1218bp,编码406个氨基酸;Pxy10R17开放阅读框全长为1200bp,编码400个氨基酸;Pxy10R18开放阅读框全长为1191bp,编码397个氨基酸。选择已报道的鳞翅目昆虫家蚕(Bombyxmori)、烟芽夜蛾(Heliothis virescens)和棉铃虫(Helicoverpa armigera)的气味受体,以及已报道的小菜蛾的6条性信息素受体与1条非典型气味受体与本实验克隆得到的3个气味受体进行序列比对和进化树分析,结果显示这3个气味受体基因与非典型气味受体和性信息素受体同源性低,而与其他的普通气味受体聚类在一起,且Pxy10R1&Pxy10R17和Pxy10gl8彼此同源性较低。半定量的结果显示,3个普通气味受体基因均在触角中表达量最大,在其他嗅觉感器,如喙、下唇须和头部中也有一定量的表达,雌、雄间无显著差异。另外,Pxy10R17在雌蛾生殖器中,Pxy10R18在雌蛾腹中也有一定表达。但3种气味受体基因在雌、雄蛾的胸、足和翅等组织中均不表达。【结论】鉴定和克隆了3个小菜蛾气味受�

关键词:小菜蛾触角气味受体基因克隆

单位:东北林业大学林学院 哈尔滨150040 中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室 北京100193

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