摘要：目的克隆苹果光响应过程中关键的bZIP（basic-leucine zipper）转录因子MdHY5，并进行表达分析及蛋白互作检测，为阐述苹果中 MdHY5在光信号过程中的功能及作用机制奠定基础。方法对苹果中具有bZIP保守结构的基因设计半定量引物进行表达分析，筛选具有光响应的bZIP转录因子。对光响应的bZIP家族基因进行BLAST比对，根据同源比对分析将目的蛋白命名为MdHY5，同时对cDNA序列设计引物进行克隆；利用MEGA5软件将MdHY5蛋白与拟南芥基因组中所有的bZIP转录因子家族成员进行聚类分析，同时对蛋白进行保守结构域分析；取苹果各组织材料进行MdHY5时空表达分析；通过对MdHY5启动子序列进行预测分析，并结合拟南芥同源基因芯片数据，进一步利用RT-PCR与半定量PCR检测MdHY5对不同光质的表达响应。将MdHY5连接到原核表达载体PGEX-4T-1上，利用IPTG对转化的大肠杆菌BL21融合蛋白进行诱导表达、蛋白杂交检测，并进行蛋白纯化；利用pull down试验验证MdHY5与MdCOP1蛋白的互作。结果通过光响应分析，在苹果中筛选到一个bZip转录因子家族成员，聚类分析显示MdHY5基因与拟南芥AtHY5同源性最高，该基因位于苹果基因组12号染色体上，基因编号为MDP0000586302，与拟南芥AtHY5结构相似，MdHY5也含有4个外显子，3个内含子。该基因cDNA序列长度为1112 bp，其中5′非编码区长度为214 bp，3′非编码区长度为403 bp，开放阅读框长度为495 bp，编码一个含有164个氨基酸残基的蛋白。蛋白保守域分析显示，MdHY5蛋白C端含有一个典型的亮氨酸拉链结构（bZIP domain），其中在bZIP结构域的N端含有一个核定位信号区域（NLS domain）。时空表达分析显示MdHY5在各组织中均表达，其中叶片中表达水平最高，花和种子中表达水平较低。利用PLACE对启动子进行了顺式作用元件分析发现，MdHY5启动子上含有G-box、GT-1

关键词：苹果 bzip转录因子 mdhy5 光响应 蛋白互作 

单位：山东省果树研究所 山东泰安271000 山东农业大学园艺科学与工程学院 山东泰安271018