摘要：【目的】聚肌胞（Poly I：C）是聚肌苷酸和聚胞苷酸的共聚物,能够模拟病毒感染后所形成的ds RNA,刺激机体产生抗病毒免疫反应和炎症反应。利用Poly I：C作为免疫刺激剂对猪外周血单核细胞（Peripheral blood mononuclear cells,PBMC）的免疫刺激试验中Poly I：C的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间的研究还未见报道。本研究探讨不同的Poly I：C免疫剂量和免疫刺激时间对猪PBMC各细胞因子和受体基因表达的影响,确定Poly I：C进行免疫试验的最佳作用浓度和体外免疫刺激培养时间,为利用Poly I：C进行RNA病毒感染的免疫应答调控机理研究提供试验依据。【方法】以长白仔猪为研究对象,利用分离的PBMC和1﹕5稀释的EDTA-抗凝血,设置Poly I：C浓度梯度（0、10、20和40μg·m L-1）和不同的体外免疫刺激培养时间（4、8、12和24 h）,通过荧光定量PCR方法测定Poly I：C免疫刺激下机体激活或者诱导表达的主要细胞因子（IL6,IL8,TNFα,IL10,IRF3,IFNα和IFNγ）和模式识别受体（TLR3和TLR4）的相对表达量,分析利用Poly I：C对猪全血和PBMC进行免疫刺激试验的最佳作用浓度和时间。【结果】猪PBMC中细胞因子和受体基因的表达量受Poly I：C浓度和免疫刺激时间的影响。各基因具有特征性的表达量变化曲线,达到最高表达变化倍数的浓度和体外培养时间各不相同。对于两个干扰素基因IFNα和IFNγ,最高表达量出现在Poly I：C免疫刺激培养4 h,而后随着培养时间的延长表达量逐渐降低,而其他5个细胞因子（IL6,IL8,TNFα,IL10和IRF3）和2个模式识别受体（TLR3和TLR4）基因随着Poly I：C浓度的增加和免疫刺激时间的延长变化倍数逐渐增加,在Poly I：C浓度为20-40μg·m L-1,免疫刺激时间为12-24 h达到最高表达量。但是,对于最高表达量出现在浓度20μg·m L-1和培养时间12 h的基因,其在浓度为40μg·m L-1和培养时间24 h表达变

关键词：猪 基因表达 

单位：山东省农业科学院畜牧兽医研究所/山东省畜禽疫病防治与繁育重点实验室 济南250100 中国农业大学动物科技学院/农业部畜禽遗传育种与繁殖重点实验室 北京100193