摘要：【目的】克隆Q型烟粉虱（Bemisiatabaci）化学感受蛋白1（chemosensory protein 1，CSP1）基因，诱导表达Q型烟粉虱CSP1重组蛋白（以下简称BtCSP1），研究其与主要寄主植物挥发性气味分子的结合特性。【方法】利用全长引物通过RT-PCR扩增并克隆Q型烟粉虱CSP1基因ORF全长，连接并构建pET-30a（＋）原核表达载体，转化入BL21（DE3）大肠杆菌感受态细胞，并用IPTG诱导表达BtCSP1重组蛋白。收集菌液后超声破碎细胞，离心取上清，经Ni2＋-琼脂糖柱结合梯度浓度咪唑洗脱纯化后，经PBS反复透析获得重组蛋白，并用Bradford法测定重组蛋白浓度。采用常见的N-苯基-1-萘胺（N-phenyl-1-naphthylamine，1-NPN）荧光探针作为报告子，利用荧光竞争结合法研究重组BtCSP1蛋白与植物挥发物的结合功能。首先用1 mmol？L-11-NPN滴定BtCSP1蛋白溶液，直至蛋白最大发射波长处的荧光值完全猝灭为止，然后再以各供试配基滴定BtCSP1-1-NPN体系，通过配基竞争猝灭1-NPN最大发射波长，并用Scatchard等方程计算表征BtCSP1与配基亲和力大小的解离常数KD。【结果】克隆了Q型烟粉虱CSP1基因ORF全长，经双酶切和连接构建了pET-30a（＋）/CSP1重组质粒，在IPTG终浓度为1 mmol？L-1的条件下诱导获得了BtCSP1重组蛋白，Ni2＋-琼脂糖柱纯化透析后测定重组蛋白浓度，稀释至1.5μmol？L-1作为工作浓度。在荧光光谱试验中，Scatchard方程线性化后（相关系数达到0.9967），显示BtCSP1与1-NPN的解离常数K1-NPN为2.78μmol？L-1，结合位点数n为0.82，表明两者结合较好，且基本是1：1结合，适合作为本试验中竞争性荧光结合试验的报告子。在荧光竞争结合试验中，有多种供试植物挥发物分子能使1-NPN的相对荧光强度降低到50%以下，其中包括能引起烟粉虱趋避行为的化合物，如3-蒈烯、p-伞花烃、顺-3-己烯-1-醇和α-蒎烯（KD值分别为26.47、

关键词：烟粉虱 化学感受蛋白 原核表达 植物挥发物 结合特性 

单位：中国计量学院生命科学学院/浙江省生物计量及检疫检验重点实验室 杭州310018 北京市农林科学院植物保护环境保护研究所 北京100097