摘要：【目的】MITF和β-catenin是黑色素生成通路中重要的调节基因,而Pax6通过调控MITF和β-catenin来调控黑色素细胞的黑色素生成,通过对只含有正常Pax6 paird domain的前102个氨基酸的Pax6~（10Neu）的研究,来探究Pax6~（10Neu）是否还有生物学功能,以及Pax6对其下游基因的作用机理。【方法】根据NCBI查找到的Pax6~（10Neu）基因序列设计PCR引物,克隆Pax6~（10Neu）,收集所得基因片段送华大基因测序确认。后通过对Pax6~（10Neu）和慢病毒表达载体的序列分析来筛选合适的酶切位点,通过分析选取Sal I和Xba I作为酶切位点,设计含有Sal I和Xba I酶切位点的PCR引物,大量克隆Pax6~（10Neu）基因,从而通过胶回收得到含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax6~（10Neu）基因。将含有酶切位点的目的片段与T载体相连,并送华大基因测序。将与T载体连接成功的质粒导入感受态细胞使其大量扩增,提取质粒,双酶切后,胶回收,得到大量含有Sal I和Xba I酶切位点的Pax6~（10Neu）基因片段,将其与含有小鼠tyrp2特异性启动子和绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒表达载体相连接,送华大基因测序确认。将连接好的慢病毒表达载体导入感受态细胞使其大量扩增,通过质粒中提试剂盒获得大量去内毒素的Pax6~（10Neu）慢病毒真核表达载体。将慢病毒真核表达载体通过细胞转染导入到培养的绵羊黑色素细胞中,使其过量表达。收集细胞,分别通过观察绿色荧光蛋白和使用RT-PCR来检测转染效率,使用RT-PCR和Western blot来检测MITF和TYR在m RNA和蛋白水平的变化,同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】与正常组相比,在m RNA水平,MITF显著升高3.2倍（P〈0.05）,TYR升高1.31倍,由此得出,Pax6~（10Neu）可以有效促进MITF m RNA的产生,对TYR m RNA产生的影响不是太显著;在蛋白质水平,MITF显著升高8.24倍（P〈0.001）,TYR显著升高2.09倍（P〈0.001）,由�

关键词：pax6 mitf tyr 黑色素 

单位：山西农业大学动物科技学院; 山西太谷030801; 山西医科大学基础医学院; 太原030001