摘要：【目的】甘薯羽状斑驳病毒（Sweet potato feathery mottle virus,SPFMV）侵染甘薯造成重要危害,本研究旨在利用反转录环介导等温扩增技术（reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP）建立一种快速、高效检测SPFMV的方法。【方法】从Gen Bank上获得SPFMV外壳蛋白（coat protein,CP）基因的核苷酸序列,利用Primer Explorer V4设计4条RT-LAMP特异性引物SPFMV-FIP（5′-TAAGCGCGGCTGCC TTCATC-CATTCAACCACCCCTGCA-3′）、SPFMV-BIP（5′-TCGGTTGTTTGGTTTGGACGGA-ATCAGTTGTCGTGTGCCTC-3′）、SPFMV-F3（5′-GAGTCTTGCGCGATATGCA-3′）和SPFMV-B3（5′-ACCCCTCATTCCTAAGAGGT-3′）,同时设计2条反转录聚合酶链反应（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）的特异性引物SPFMV-F（5′-TCTAATGAGAACACTGAA TT-3′）和SPFMV-R（5′-TTGCACACCCCTCATTCCTAAG-3′）。分别设置F3/B3﹕FIP/BIP引物浓度比（1﹕1、1﹕2、1﹕4、1﹕6、1﹕8和1﹕10）,d NTPs浓度梯度（0.025、0.125、0.225、0.325、0.425、0.525、0.625、0.725和0.825mmol·L-1）,Betaine浓度梯度（0.4、0.7、1.0、1.3和1.6 mol·L-1）,反应温度（59、61、63、65、67和69℃）和反应时间（20、30、40、50、60、70、80和90 min）,对RT-LAMP反应体系各条件进行优化,确定最佳反应体系。通过测序及酶切对RT-LAMP产物进行鉴定。以携带SPFMV、甘薯C病毒（Sweet potato virus C,SPVC）、甘薯褪绿矮化病毒（Sweet potato chlorotic stunt virus,SPCSV）、甘薯病毒2（Sweet potato virus 2,SPV2）、甘薯潜隐病毒（Sweet potato latent virus,SPLV）、甘薯G病毒（Sweet potato virus G,SPVG）、甘薯褪绿斑病毒（Sweet potato chlorotic fleck virus,SPCFV）和健康甘薯叶片的总RNA为模板,分别进行RT-LAMP和RT-PCR特异性检测;带有SPFMV的甘薯总RNA进行10倍梯度稀释,以RNA原液、10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6和10-7稀释液为模板进行RT-LAMP和RT-PCR灵敏度测定。最后利用优化的RT-LAMP体系对山东省多地采�

关键词：甘薯 甘薯羽状斑驳病毒 反转录环介导等温扩增技术 检测 

单位：山东省农业科学院植物保护研究所植物病毒学实验室; 济南250100