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二化螟实时荧光定量PCR内参基因筛选和表达稳定性评价

徐红星; 王国荣; 鲁艳辉; 杨亚军; 郑许松; 田俊策; 吕仲贤 中国水稻科学 2019年第01期

摘要:[目的]筛选特定试验条件下二化螟(Chilosuppressalis)稳定表达的内参基因,为二化螟基因表达研究奠定基础。[方法]根据二化螟转录组测序结果挑选出11个候选基因,利用实时荧光定量PCR测定其在二化螟不同发育历期、不同组织、温度处理、杀虫剂处理、取食不同饲料、取食不同水稻、dsRNA处理和混合样品的表达量,利用RefFinder、BestKeeper、GeNorm和NormFinder等软件和ΔCt值对11个候选基因的稳定性进行评估。[结果]5种分析方法表明,在二化螟不同发育历期稳定性较高的内参基因是AK、RPL10和EF1,不同组织中稳定性较高的内参基因是EF1、TUB和ACTB,不同温度下较稳定的内参基因为TUB、RPL10和EF1,杀虫剂处理样品中较稳定的是TF4和ACTA,取食不同饲料较稳定的是TUB、TF4、EF1和RPL10,取食不同品种水稻较稳定的是TUB和EF1,dsRNA处理样品中较稳定的是TUB、AK、ACTB和EF1,混合样品中较稳定的是EF1、TUB和ACTB。[结论]为不同试验条件下选择合适的内参基因提供了参考,也有利于在二化螟基因表达研究中获得更加可靠准确的数据。

关键词:二化螟内参基因荧光定量pcr基因表达

单位:浙江省农业科学院农业部农产品信息溯源重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地; 杭州310021; 杭州市萧山区农业技术推广中心; 杭州311202

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