摘要:目的建立代谢型谷氨酸受体1(mGluR1)基因mRNA表达水平的TaqMan real-time PCR检测方法。方法以争actin为内参基因,根据GenBank中人mGluR1及β-actin基因序列,分别设计了两套特异性引物和TaqMan探针,接着对反应的退火温度、引物浓度、探针浓度、Mg^2+浓度进行优化,然后以优化的条件建立相对定量标准曲线,并对该方法的稳定性进行分析。结果mGluR1及争actin基因的real-time PCR扩增效率分别为99.7%和100.0%;相对定量标准曲线的CT值线性范围分别为8.1~30.9和11.9~32.1,相关系数分别为0.999及1.000;批内及批闻变异系数〈6.4%。结论本研究所建立的针对mGluR1 mRNA表达水平的Taqman real—time PCR检测方法具有扩增效率高、稳定性好等特点,为进一步探索mGluR1的功能及其mRNA表达水平的变化和各种疾病发生、发展的相关性提供了方法学基础。
关键词:代谢型谷氨酸受体 taqman探针 pcr mrna
单位:西南民族大学生命科学与技术学院 成都610041 成都三六三医院神经内科 成都610041
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