摘要:目的:将人转铁蛋白受体(hTfR)基因克隆到慢病毒表达载体pLENTI6.3,鉴定其正确性,体外感染小鼠神经干细胞并检测其表达,为活体神经干细胞(NSCs)MR分子成像提供实验基础。方法利用聚合酶链反应技术(PCR)扩增hT‐fR基因,并克隆到pLENTI6.3载体;通过菌落PCR初步筛选、BamH1酶切鉴定和测序鉴定构建的pLENTI6.3‐hTfR‐IRES‐EGFP重组载体,利用Lipofectin2000试剂将PLP1、PLP2、PLP‐VSVG和pLenti6.3‐hTfR‐IRES‐EGFP共转染293T细胞进行慢病毒包装,48 h后收集病毒上清。体外感染NSCs ,Western bolt检测hTfR的表达。结果成功构建了hTfR基因慢病毒表达载体,包装的慢病毒颗粒成功感染NSCs ,Western bolt鉴定hTfR在NSCs过表达。结论 pLENTI6.3‐hTfR‐IRES‐EG‐FP慢病毒表达载体构建成功,并建立其慢病毒表达系统,为下一步进行活体干细胞M R分子成像实验研究奠定基础。
关键词:转铁蛋白受体 慢病毒载体 干细胞 磁共振成像
单位:郑州大学附属郑州中心医院神经外科 郑州450007
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