摘要:目的构建抗人结缔组织生长因子(CTGF)单链抗体(scFv)噬菌体展示文库。方法用重组人CTGF(rhCTGF)免疫balb/c小鼠,表达CTGF抗体后取小鼠脾脏获得B细胞,提取总RNA后反转录为cDNA,聚合酶链反应(PCR)获取重链可变区(vh)和轻链可变区(v1),vh和vl再次PCR装配为vl—linker.vh即scFv基因片段,并与噬菌粒PAKl00酶连接,形成含有抗结缔组织生长因子单链抗体基因的目的噬菌粒;电转化入大肠杆菌XLl-blue,加入辅助噬菌体扩增后,建立噬菌体展示库重组库。结果经过凝胶电泳及噬菌粒基因测序分析,证实成功构建了抗结缔组织生长因子单链抗体定向免疫库。结论成功的构建了抗结缔组织生长因子单链抗体库,为制备抗结缔组织生长因子单链抗体奠定基础。
关键词:结缔组织生长因子 噬茵体展示 噬菌体展示文库 抗结缔组织生长因子单链抗体
单位:河南大学淮河医院 开封475000 河南大学医学院天然药物与免疫重点实验室
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