摘要：目的优化鹿胎DNA提取方法、聚合酶链式反应(PCR)反应参数,建立一种特异、准确的鹿胎快速检测试剂。方法采用改良盐析法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法A、B提取鹿胎DNA;选取市面常见4种DNA聚合酶进行对比研究;运用经典的控制变量法和交叉实验优化退火温度及退火时间;建立鹿胎快速检测试剂,并对其进行评价。结果采用改良SDS法B提取的DNA,其A260/A280比值为(1. 74±0. 05),质量浓度为(0. 250±0. 005)μg·L-1;选用高保真Taq DNA聚合酶,其PCR产物浓度可达(0. 185±0. 005)μg·L-1;筛选出最适退火温度58℃和退火时间30 s;建立的快速检测试剂能够特异准确鉴定鹿胎及其伪品,且在563 bp处有1条清晰明亮条带。结论鹿胎快速检测试剂融合了最优DNA提取方法、最优PCR反应参数,能够高准确性、高特异性完成鹿胎及其伪品的鉴定工作。

关键词：鹿胎 dna提取优化 退火温度 快速检测 

单位：北华大学医学技术学院; 吉林吉林132013; 吉林省中药DNA指纹检测技术科技创新中心; 吉林吉林132013; 吉林市雷博科技有限公司; 吉林吉林132013