摘要：目的探讨重组慢病毒介导的体外转导OPCML基因的可行性及其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞的抑制作用.方法采用PCR技术,用基因特异性引物将OPCML基因的cDNA从CD1小鼠脑组织中扩增,并将OPCML基因克隆到慢病毒载体表达质粒pWPI-GFP上,构建慢病毒载体表达质粒pWPI-OPCML;将pWPI-OPCML或pWPI-GFP（空载体对照）质粒和包装质粒pCMVdR8.74、pMDG共同转染人胚胎肾上皮细胞系293T细胞,获得携带OPCML和绿色荧光蛋白（GFP）基因的重组慢病毒WPI-OPCML或仅携带GFP基因的重组慢病毒WPI-GFP;用重组慢病毒WPI-OPCML和WPI-GFP分别转导靶细胞,即人卵巢癌细胞系A2780、OCC1细胞和小鼠正常卵巢上皮细胞系CD1细胞,以未转染任何基因者为空白对照.通过细胞增殖实验、细胞聚合力实验、细胞周期分析和体内成瘤实验观察OPCML基因对卵巢癌细胞的抑制作用.结果（1）OPCML基因能被重组慢病毒高效地转导入靶细胞,转导效率几乎达100%,并稳定表达;蛋白印迹法检测显示,靶细胞中OPCML和GFP蛋白均有表达.（2）细胞增殖实验显示,A2780细胞中,转导OPCML基因72 h后的A2780/OPCML细胞为（7.6±1.0）×10^5个,明显少于未转导基因的A2780细胞或仅转导空载体的A2780/pWPI细胞[分别为（20.0±2.6）×10^5和（18.1±1.7）×10^5个;P＜0.01];但OCC1和CD1细胞中,OPCML基因对细胞的增殖无明显的影响（P＞0.05）.（3）细胞周期分析显示,OPCML基因对A2780细胞的细胞周期有明显的阻滞作用（转导前、后G0～G1期细胞分别为67%、75%;P＜0.05）,但对OCC1、CD1细胞则无明显阻滞作用（P＞0.05）.（4）细胞聚合力实验显示,与空载体对照相比,OPCML基因能明显增强细胞的黏附力（P＜0.05）.（5）移植瘤实验显示,将A2780/OPCML细胞注射到裸鼠皮下,4只裸鼠中仅1只裸鼠有肿瘤生长,其肿瘤重量为10 mg,显著低于注射A2780、A2780/pWPI细胞的裸鼠[各4只裸鼠均有肿瘤生长,其肿瘤重量

关键词：慢病毒属 卵巢肿瘤 细胞黏附分子 转染 

单位：广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科; 南宁530021; Ottawa; Cancer; Center; University; of; Ottawa