摘要：目的 探讨利用RNA干扰（RNAi）技术阻抑survivin基因的表达,对宫颈癌HeLa细胞放射敏感性和化疗敏感性的影响.方法 通过脂质体介导,将含survivin基因小分子干扰RNA的重组真核表达质粒pSilencer2.1-s2、阴性对照质粒pSilencer2.1-NC和空载质粒pSilencer2.1-U6 neo转染宫颈癌细胞系HeLa,获得HeLa-s2、HeLa-NC和HeLa-U6 neo细胞,同时设未转染的HeLa细胞为阴性对照.RT-PCR技术、蛋白印迹法分别检测survivin mRNA和蛋白的表达水平,并计算survivin mRNA和蛋白表达抑制率;激酶活性检测法测定波长在405 nm处的吸光度（A405）值,表示半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase-3）活性;流式细胞仪检测细胞凋亡率;平板克隆形成实验观察细胞的放射敏感性变化,以克隆形成率表示;四甲基偶氮唑蓝比色法检测细胞存活率并计算顺铂的50%抑制浓度（IC50）.结果 与HeLa-NC、HeLa-U6 neo及未转染的HeLa细胞比较,HeLa-s2细胞survivin mRNA和蛋白表达水平明显下降,survivin mRNA和蛋白表达抑制率分别为（62.8±0.3）%和（60.1±0.5）%.HeLa-s2细胞的A405值为1.261±0.043,未转染的HeLa细胞的A405值为0.314±0.012,两者比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.HeLa-s2与未转染的HeLa细胞相比,细胞凋亡率明显升高（P＜0.05）,分别为（29.23±1.41）%和（2.74±0.32）%.不同照射剂量下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞分别比较,克隆形成率均明显降低（P＜0.05）.在同一顺铂浓度下,HeLa-s2与未转染的HeLa细胞比较,细胞存活率显著降低（P＜0.05）,HeLa-s2细胞对顺铂的IC50值较未转染的HeLa细胞下降显著（P＜0.05）,分别为（0.873±0.021）和（9.212±0.033）μg/ml.结论 利用RNAi技术可阻抑HeLa细胞中survivin基因的表达,增强caspase-3活性,诱导细胞凋亡,显著提高细胞的放射敏感性和对顺铂的化疗敏感性.

关键词：rna干扰 微管相关蛋白质类 宫颈肿瘤 细胞凋亡 辐射耐受性 

单位：第四军医大学西京医院妇产科; 西安710032; 第四军医大学西京医院放射治疗科; 西安710032