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腺病毒介导的PTEN cDNA对子宫内膜癌细胞凋亡的影响

杨培丽; 刘玉环; 崔英; 蔡在龙; 毛积芳 中华妇产科 2006年第08期

摘要:目的 研究外源性PTEN cDNA的表达对子宫内膜癌细胞凋亡的影响.方法 用细菌内同源重组法构建含野生型抑癌基因PTEN cDNA的复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN,蛋白印迹法鉴定转染Ad-PTEN后,子宫内膜癌细胞系RL95-2细胞中PTEN蛋白的表达.将RL95-2细胞随机分成3组:(1)空白对照组:仅用培养基而不加腺病毒;(2)Ad-CMV组:转染复制缺陷型空载体腺病毒Ad-CMV;(3)Ad-PTEN组:转染复制缺陷型腺病毒Ad-PTEN.前两组均为对照组.采用细胞膜磷脂酰丝氨酸(PS)外翻检测、活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)测定及染色体DN段化检测这3种方法,从不同角度检测PTEN蛋白的表达对RL95-2细胞凋亡的影响.结果 经Ad-PTEN介导的PTENcDNA能够在RL95-2细胞中持续有效地表达.Ad-PTEN组转染后24、48、72、96 h,RL95-2细胞中细胞膜PS外翻细胞分别占(6.09±1.01)%、(9.98±2.17)%、(11.74±2.65)%、(27.69±8.67)%,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);RL95-2细胞中活化caspase-3细胞分别占(2.6±0.5)%、(18.0±4.4)%、(21.8±5.1)%、(33.7±9.9)%,各个时间点分别与两个对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).Ad-PTEN转染后48 h,RL95-2细胞中出现特异性的染色体DNA梯状条带.结论 腺病毒介导的PTEN cDNA能够有效地在RL95-2细胞中表达,并诱导其凋亡,为子宫内膜癌的基因治疗提供了理论基础.

关键词:磷酸单酯水解酶类肿瘤抑制蛋白质类腺病毒科子宫内膜肿瘤细胞凋亡

单位:武装警察部队北京市总队医院妇产科; 100027; 第二军医大学长海医院基础医学部生物化学与分子生物学教研室; 上海200433; 第二军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室; 上海200433

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