摘要：目的构建含人端粒酶逆转录酶启动子．二步转录增强系统（hTERTp．TSTA）调控下的活性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（rev-caspase-3）的重组腺病毒AdHTVP2G5-rev-casp3，并检测其对卵巢上皮性癌（卵巢癌）的治疗作用。方法采用基因重组法构建AdHTVP2G5-rev-casp3，经DNA测序鉴定并证实其序列正确。实验分为4组：分别以AdHTVP2G5-rev-casp3（AdHTVP2G5-rev-casp3组）、含hTERTp调控下的rev—caspase-3的重组腺病毒AdHT-rev-casp3（AdHT-rev-casp3组）和含人巨细胞病毒启动子（CMVp）调控下的rev—caspase-3的重组腺病毒Ad—rev—casp3（Ad-rev-casp3组）转染人卵巢癌细胞系AO细胞及正常人脐静脉内皮细胞系HUVEC细胞，以含hTERTp-TSTA调控下的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的重组腺病毒AdHTVP2G5-EGFP（AdHTVP2G5-EGFP组）为阴性对照。采用蛋白印迹法（westernblot）、细胞计数法（CCK-8）、流式细胞术分别检测各组AO和HUVEC细胞中caspase-3的活性单位p17蛋白及其底物聚腺苷二磷酸-核糖多聚酶的裂解片段p85蛋白的表达强度、细胞存活率、细胞凋亡率和细胞周期的变化；westernblot法检测各组裸鼠移植瘤及肝脏组织中p17蛋白的表达强度，检测各组裸鼠生存率、肿瘤体积、体内肝酶水平及各器官组织的病理检查结果。结果AO细胞中p17蛋白表达强度，AdHTVP2G5-rev—casp3组明显高于Ad-rev-casp3和AdHT-rev-casp3组；而HUVEC细胞中AdHTVP2G5-rev-casp3组则明显低于Ad—rev—casp3，与AdHT-rev-casp3组相似。当病毒感染复数（UOI）为70时，AO细胞的存活率和凋亡率，AdHTVP2G5．rev—casp3组（分别为17．8％和40．2％）与AdHT—rev—casp3组（分别为75．2％和16．1％）比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；而HUVEC细胞的存活率和凋亡率，AdHTVP2G5．rev—casp3组（分别为97．7％和2．1％）与AdHT-rev-casp3组（分别为98．5％和1．7％）比较，差异则无统计学意义（P〉0

关键词：卵巢肿瘤 端粒 末端转移酶 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 

单位：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院妇产科; 100730