摘要:目的研究应用RNA干扰(RNAi)技术逆转卵巢上皮性癌(卵巢癌)耐药细胞中WWOX基因的表达,并探讨WWOX基因与卵巢癌细胞顺铂耐药的关系。方法将设计合成的针对WWOX基因的特异性小分子干扰RNA(siRNA),用脂质体瞬时转染法将其转染进WWOX基因高表达的卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/SB细胞中,用RT-PCR技术和蛋白印迹法分别测定转染前后SKOV3/SB细胞中WWOX mRNA及蛋白表达的变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法检测转染前后SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数;应用流式细胞仪检测转染前后SKOV3/SB细胞的生长周期,高效液相色谱仪测定转染前后SKOV3/SB细胞中顺铂的药物浓度。实验分为5组:(1)SKOV3组:接种SKOV3细胞;(2)SKOV3/SB组:接种SKOV3/SB细胞;(3)SKOV3/SB阴性对照转染组:接种转染阴性对照序列的SKOV3/SB细胞;(4)SKOV3/SB脂质体转染组:接种转染脂质体的SKOV3/SB细胞;(5)SKOV3/SBsiRNA转染组:接种转染siRNA的SKOV3/SB细胞。结果转染48h后,SKOV3、SKOV3/SB、SKOV3/SB阴性对照转染、SKOV3/SB脂质体转染、SKOV3/SBsiRNA转染组细胞中WWOXmRNA的表达水平分别为0.647±0.025、2.239±0.030、2.392±0.041、2.3794-0.047、1.219±0.032,WWOX蛋白的表达水平分别为1.368±0.028、1.639±0.031、1.580±0.025、1.552±0.034、0.653±0.017,SKOV3/SB siRNA转染组与其他各组比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。转染siRNA前、后,SKOV3/SB细胞对顺铂的耐药指数由5.04降至3.89;细胞周期中G,期由39.2%增至45.6%,S期由50.4%降至37.5%;耐药细胞内顺铂浓度由9.43ng/L升至23.45ng/L,分别比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。结论针对WWOX基因合成的特异性siRNA能明显抑制SKOV3/SB细胞中WWOX mRNA和蛋白的表达,并能在一定程度上恢复其对顺铂的敏感性,推
关键词:卵巢肿瘤 rna干扰 rna 小分子干扰 氧化还原酶类
单位:广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科 南宁530021 广西壮族自治区人民医院妇产科 南宁530021
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