摘要：目的在卡介苗中建立基因敲除技术.方法通过分别设计两对引物,将靶基因[DNA结合蛋白1(MDP1)基因]通过聚合酶链反应(PCR)的方法扩增得到2个片段,分别插入pKO质粒中,构建得到基因敲除质粒pKO-MDP1,电转入至卡介苗菌株细胞内并与BCG基因组中的MDP1基因同源交换,筛选出敲除菌株,并测其生长曲线.结果通过2次PCR筛选和1次蔗糖反筛选后得到的、并在含潮霉素培养基上不能生长的菌株为MDP1基因敲除菌株,对敲除菌株与原代菌株每12 h测定其菌液的600 nm处吸光度(A600)值,连续16 d.两者的生长速度曲线呈现"S"形,两者之间的生长速度未见明显差别.结论 pKO质粒可作为基因敲除有用的质粒载体,MDP1基因可能是影响BCG生长的因素之一,但不是惟一的因素.

关键词：卡介苗 mdp1基因敲除技术 聚合酶链反应 质粒载体 

单位：101149; 北京市结核病胸部肿瘤研究所细菌免疫研究室; 清华大学生物系