摘要：目的建立简便有效的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,Mtb）总RNA提取方法。方法采用5种方法,分别为160、240和400W超声波联合Trizol法（简称＂160W超声法＂、＂240W超声法＂和＂400W超声法＂）、玻璃珠（简称＂玻珠＂）联合Trizol法（简称＂玻珠法＂）和Trizol法（简称＂不加玻珠法＂）,对结核分枝杆菌标准株H37Rv进行破壁,提取总RNA。通过荧光定量逆转录PCR评价不同破壁方法对Mtb总RNA提取效果的影响,以灭菌超纯水代替模板为阴性对照。每种方法分别提取3份样本进行检测。最后结果为3份标本的平均值。结果玻珠法检测组Ct值为20.67,△Rn值为0.644;400W超声法检测组Ct值为22.09,△Rn值为0.571;240W超声法检测组Ct值为21.86,△Rn值为0.503;160W超声法检测组Ct值为25.21,△Rn值为0.411;不加玻珠法检测组Ct值为28.40,△Rn值为0.299;阴性对照Ct值为40.00,△Rn值为0.000。结论直观地从试验结果来看,玻珠法对结核分枝杆菌破壁效果好于超声法。

关键词：分枝杆菌 结核 rna 细菌 逆转录聚合酶链反应 

单位：四川大学华西公共卫生学院医学检验教研室 成都610041 四川省疾病预防控制中心结核病预防控制所