摘要：对MTB线粒体翻译控制（mitochondrial translation control，MTC）蛋白MTC28基因进行克隆，构建真核表达质粒并在昆虫细胞中表达MTC28蛋白。采用PCR技术从MTBH37Rv标准株基因组中扩增MTC28基因片断，MTC28基因片断和质粒pFastbacl经EcoRI和XhoI双酶切，T4DNH连接酶连接，构建重组质粒pFastbacl—MTC28，转染DH5a感受态细菌，在含有氨苄青霉素溶菌肉汤（lysogenybroth，LB）固体培养基中筛选阳性克隆，挑选生长的菌落进而在含有氨苄青霉素的液体LB培养基中进行细菌克隆。PCR鉴定目的基因插入质粒后，阳性克隆细菌进行质粒（pFastbacl—MTC28）的提取。pFastbacl—MTC28质粒转染DH10Bac感受态细菌构建重组杆状质粒（Bacmid-MTC28），用含有庆大霉素、卡那霉素和四环素的液体LB培养基进行细菌克隆，采取蓝白斑技术筛选阳性菌落。PCR鉴定为阳性的细菌进行杆状重组质粒（Bacmi＆MTC28）的提取。利用脂质介导的转染技术，将杆状重组质粒（Bacmid-MTC28）转染sf9昆虫细胞中，包装重组杆状病毒，并表达蛋白质。结果成功构建了MTC28真核表达质粒，建立了杆状病毒表达MTC28蛋白的表达体系，并表达MTC28蛋白，通过纯化获得了高纯度且均一化的MTC28蛋白。

关键词：分枝杆菌 结核 线粒体蛋白质类 基因 线粒体 

单位：广东省结核病控制中心; 广州510630; 广州市胸科医院肺部疾病研究所