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降钙素基因相关肽对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及蛋白激酶Cα信号途径的调控作用

付红敏 李利 王亚军 汤春辉 米弘瑛 许峰 匡凤梧 中华危重病急救医学 2010年第05期

摘要:目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高氧暴露下肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的促增殖作用及其蛋白激酶Cα/核转录因子-κB(PKca/NF—κB)信号途径的调控机制。方法将原代分离培养的孕21d胎鼠AECⅡ分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP拮抗剂组。空气组和高氧组分别在21%0z或85%。中暴露24h;高氧CGRP组在高氧处理前加入CGRP,高氧CGRP拮抗剂组同时加入CGRP和CGRP受体拮抗剂CGRP8—37。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法和流式细胞术测定细胞增殖能力和不同细胞周期细胞比例;蛋白质免疫印迹法(Westernblotting)检测胞膜和胞质PKCa的表达;激光共聚焦检测NF—κBp65的细胞核表达。结果高氧组G0/G1期细胞比例明显高于空气组[(80.652±6.253)%比(45.825±2.899)%],而细胞增殖率[(68.752±5.766)%比(100.000±6.682)%]及S期、G2/M期细胞比例[分别为(14.198±4.785)%比(27.470土2.775)%,(5.148±1.688)%比(26.708±1.863)%]均低于空气组(均P〈0.01)。CGRP干预可提高高氧暴露AECⅡ的增殖能力[(94.813±6.102)%],使s期和G2/M期细胞增多[(30.547±9.861)%,(17.668±9.509)%,均P〈0.013。高氧组胞膜与胞质PKCa比值显著低于空气组(0.63±0.10比1.00±0.09),而NF—KBp65的荧光强度高于空气组(22.98±2.20比14.54±2.35);高氧CGRP组胞膜与胞质PKCa比值(1.41±0.23)及核内NF—KBp65荧光强度(35.38±3.37)均高于高氧组(0.63±0.10,22.98±2.20)及高氧CGRP拮抗剂组(O.74±0.10,24.88±1.81,均P〈0.01)。结论cGRP可促进高氧暴露下AECⅡ的生长增殖;PKCα参与了CGRP对细胞作用的信号传递,而NF—κB是PKCα的下游分子之一,仅部分执行PKCα的效应。

关键词:蛋白激酶c降钙素基因相关肽高氧

单位:云南省第一人民医院儿科 昆明650032 重庆医科大学儿童医院PICU

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