摘要：目的观察线粒体DNA（mtDNA）对脂多糖（LPS）诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的放大作用，并初步探讨其可能机制。方法提取SD大鼠肝脏组织mtDNA，采用超微量分光光度计及1％琼脂糖凝胶电泳检测其浓度及质量。分离和培养SD大鼠肺泡巨噬细胞，取处于对数生长期的细胞，并将其分为磷酸盐缓冲液（PBS）对照组、LPS组、mtDNA组和LPS＋mtDNA组4组，前3组分别在肺泡巨噬细胞培养基中加入等体积的PBS、LPS1mg／L或mtDNA10mg／L刺激6h和12h；LPS＋mtDNA组在肺泡巨噬细胞培养基中加入1mg／LPS刺激6h后再加入10mg／LmtDNA共同刺激6h。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞上清液中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量；采用蛋白质免疫印迹试验（Western Blot）检测细胞焦亡关键蛋白Gasdermin D（GSDMD）的表达。结果①所提取的大鼠肝脏组织mtDNA在波长260nm和280nm处的吸光度比值（A260/280）介于1．8-2．0，琼脂糖凝胶电泳可见大小约16kb的单一条带。②LPS、mtDNA分别刺激肺泡巨噬细胞6h和12h后IL-1β、TNF-α含量均较PBS组明显升高。LPS刺激6h后再加入mtDNA共同刺激6h组IL-1β含量较LPS12h组进一步升高（ng／L：366．27±23．35比154．70±23．32，P〈0．01），而TNF-α含量与LPS12h组相比差异无统计学意义（ng/L：836．13±25．01比802．67±30．48，P〉0．05）。⑧LPS组、mtDNA组、LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达均较PBS组明显升高（GSDMD／β-actin：1．77±0．05、1．65±0．04、2A0±0．05比1．00±0．02，均P〈0．01），且LPS＋mtDNA组GSDMD蛋白表达较LPS组进一步升高（P〈0．01）。结论mtDNA对LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应具有放大作用，其机制可能与mtDNA增加细胞焦亡有关。

关键词：线粒体dna 细胞焦亡 肺泡巨噬细胞 炎症反应 

单位：南昌大学第一附属医院重症医学科; 江西南昌330006; 南昌大学第一附属医院肿瘤科; 江西南昌330006