摘要：目的：以tRNA^val-shRNA表达框技术筛选高效的HBV C基因siRNA靶位。方法：针对HBV C基因序列设定5个siRNA靶位，以一步重叠延伸PCR技术生成含tRNA^val启动子的shRNA表达框（SEC），分别与HBV C基因与EGFP融合表达质粒（pC-EGFP）共转染AD293细胞，转染后48h，流式细胞术检测融合基因荧光表达情况，半定量RT-PCR法检测HBV-C基因mRNA表达水平。以筛选的shRNA表达框转染hepG2．2．15细胞，72h后放免法检测细胞培养上清HbsAg、HbeAg水平，RT-PCR检测细胞HBV pgRNA水平。结果：共转染shRNA表达框能有效抑制融合表达质粒（pC-GFP）荧光强度和HBV C mRNA表达，其中SEC-492i抑制效率最佳，而SEC-282i相对较差。选定的492i表达框（SEC-492i）及282ishRNA表达框（SEC-282i），均呈剂量依赖性抑制hepG2．2．15细胞HbeAg分泌和HBV pgRNA水平，其中SEC-492i抑制HbeAg和HBV pgRNA水平明显优于SEC-282i。结论：在选定的5个siRNA靶位中，以492i靶位RNAi效率最高。tRNA^val-shRNA表达框技术可用于抗HBV高效siRNA靶位的筛选，有进一步推广应用价值。

关键词：肝炎病毒 乙型 基因 shrna表达框 小干扰rna 

单位：浙江大学医学院附属第一医院传染病研究所; 浙江杭州310003