摘要：目的：构建一个能在MC3T3-E1细胞中稳定表达，并具有生物学活性的VEGF165和VEGF121基因表达载体。方法：采用RT—PCR技术从HL-60细胞中扩增人VEGF165和VEGF121基因，将获得的基因定向插入pcDNA3．1（＋）真核表达质粒中，测序正确后用脂质体将表达质粒转染入MC3T3-E1细胞。细胞经G418加压有限稀释筛选，采用ELISA法、Western blot法及免疫荧光法检测VEGF蛋白表达，并用MTT法检测表达的蛋白对血管内皮细胞株（HUECV304）的增殖活性影响。结果：通过基因测序表明获得的yEGF165和VEGF121与GeneBank登录的序列一致，构建的质粒分别为VEGF165／pcDNA3．1（＋）质粒和VEGF121／pcDNA3．1（＋）质粒，ELISA及Western blot检测结果均表明VEGF165和VEGF121基因转染MC3T3-E1后能在细胞中稳定表达，表达产物能明显促进HUECV304细胞生长。结论：基因转染的MC3T3-E1细胞能稳定、高效表达具有生物学活性的VEGF165和VEGF121重组蛋白。

关键词：3t3细胞 基因表达 转染 质粒 

单位：浙江大学医学院附属第一医院; 浙江杭州310003