摘要:目的:制备抗人间充质干细胞(hMSCs)的单克隆抗体,为鉴定、分选hMSCs奠定基础。方法:以多供体hMSCs免疫BALB/C小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,并以间接免疫荧光法、免疫组织化学法和流式细胞术等检测单克隆抗体在细胞及组织中的表达。结果:建立了5个能分泌抗人间充质干细胞的单克隆抗体杂交瘤细胞株,该组单抗能与人间充质干细胞特异性结合,而对所检测的人间充质和非间充质来源的组织和细胞均未见交叉反应,5个单抗的相对亲和力分别为:ZUB11×10^6、ZUB41×10^5、ZUC31×10^6、ZUE121×10^5、ZUF101×10^5;表位分析:ZUB1、ZUE12、ZUF10针对相同的表位,ZUC3和ZUB4则分别针对不同的表位。流式细胞分析显示分离培养的hMSCs阳性表达率为ZUB187.39%、ZUB488.07%、ZUC388.12%、ZUE1269.89%和ZUF1083.679/6。结论:5株杂交瘤分泌的单克隆抗体均能与人间充质干细胞发生特异性结合,为深入研究hMSCs的生物学功能奠定了基础。
关键词:抗体 单克隆 荧光抗体技术 间接 免疫组织化学
单位:浙江大学医学院免疫学研究所; 浙江杭州310031; 浙江大学医学院附属第一医院; 浙江杭州310003
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