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含RGD肽CP9修饰的聚乙烯亚胺复合物的理化特性及其转基因功能的研究

李达; 王青青; 汤谷平; 李经忠; 黄宏靓; 沈芬平; 余海 浙江大学学报·医学版 2006年第06期

摘要:目的:构建含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)肽CP9修饰的聚乙烯亚胺(PEI),观察其理化特性和转基因功能。方法:通过琥珀酰亚胺-3-(2-嘧啶二硫)丙酸酯(N-Succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)]propionate,SPDP)将CP9偶联到PEI上,合成新型转基因载体CP9-PEI。用^1H-NMR和FT-IR验证CP9的偶联;用凝胶电泳阻滞实验、电镜和粒径检测,观察CP9-PEI浓缩质粒DNA的能力以及浓缩质粒DNA后形成的转染颗粒形态和粒径;通过CP9-PEI在人肝癌细胞株HepG2中的转染实验来验证CP9对PEI的转染效率的影响;通过游离CP9肽的竞争抑制实验验证CP9-PEI的整合素靶向功能。结果:CP9成功偶联到PEI上;CP9-PEI能有效浓缩质粒DNA,形成的转染颗粒形态为圆形或类圆形,在N/P比为10时,粒径约为200nm。CP9-PEI的转染效率是PEI的2倍,游离CP9肽能抑制CP9-PEI的转染效率。结论:修饰了CP9的PEI能有效增加转染效率,具有整合素的靶向能力,是一种具有应用前景的转基因载体。

关键词:聚乙烯亚胺转基因遗传载体精氨酸甘氨酸

单位:浙江大学免疫学研究所; 浙江杭州310058; 浙江大学化学生物和药物化学研究所; 浙江杭州310028

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