摘要：目的：获取抗A-CD14单克隆抗体（单抗）ZCH-7—2F9（简称2F9）轻链可变区（VL）和重链可变区（VH）基因，为2F9单链抗体（ScFv2F9）的构建奠定基础。方法：复苏2F9和NS-1细胞株，并亚克隆2F9细胞株，从其最佳克隆93A10提取总RNA，RQ1 RNase—Free DNase处理污染的DNA，与NS—1细胞进行同步对照，通过RT—PCR，扩增获得2F9单抗VL基因和VH基因，分别克隆入pGEM-T Easy载体，然后转化DH5a细菌，酶切鉴定并纯化阳性重组子，测序后进行在线核苷酸序列分析。结果：2F9单抗VL基因全长321bp，编码107个氨基酸，归属于小鼠Ig的Vk基因，氨基酸序列分析结果显示，VL含有明确的4个框架区（FR）和3个抗原决定簇互补区（CDR），在第23位和第88位为半胱氨酸，是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸；其VH基因全长360bp，编码120个氨基酸，归属于小鼠Ig的VH基因，氨基酸序列分析结果显示，VH含有明确的4个框架区和3个抗原决定簇互补区，在第22位和第96位为半胱氨酸，是与抗体二硫键形成有关的两种特征性氨基酸。结论：经核苷酸序列分析证明所克隆的基因分别是2F9单抗的VL和VH基因，为2F9基因工程抗体研究奠定了坚实的基础。

关键词：抗体 单克隆 抗原 cd14 序列分析 

单位：浙江大学医学院附属儿童医院血液肿瘤科; 浙江杭州310003