摘要：目的：构建携带血管形成素-1（ANG—1）基因腺相关病毒（AAV）载体，通过病毒包装和纯化及滴定，获得高纯度高感染性的病毒液，并转染到乳猪骨髓干细胞中，获得有效表达，为进行血管再生的基因治疗研究奠定基础。方法：利用PCR技术，获取目的基因ANG-1，通过重组DNA技术得到ANG-1与pUC119的重组质粒，采用SalⅠ和BglⅡ双酶将pUCll9中的目的基因ANG-1基因片断切出，再克隆到质粒pSNAV2．0中。用Lipofeetamine将pSNAVANG-1质粒转染293细胞后，用G418选择培养获得293／AAV：ANG—1细胞株，产生了有传染性的病毒颗粒，纯化并进行病毒DNA颗粒滴度测定。分别将绿色荧光蛋白（GFP）基因重组腺相关病毒（rAAV。GFP）及rAAV2 ANG—1感染猪骨髓干细胞，并对转染效率及转染后表达情况进行初步研究。结果：测序证实ANG—1与GenBank提供的原始序列完全-致。重组载体经酶切鉴定与PCR筛选证实重组质粒和预期结果完全-致，在新的重组质粒中，ANG-1有-套CMV启动子和PolyA终止子系统。293细胞包装病毒效果良好，携带ANG-1的感染性AAV滴度为9×10^11v．g／ml，用Western杂交法检测显示猪骨髓干细胞中表达ANG—1。1×10^6v．g／mlrAAV2GFP感染CD34阳性细胞48h后55％左右的细胞有明显的荧光。结论：ANG-1基因AAV构建成功，并能在骨髓干细胞中有效表达，为严重缺血性疾病基因治疗的研究奠定了基础。

关键词：重组 遗传 转染 腺相关病毒载体 骨髓干细胞 

单位：浙江省台州医院心胸外科 浙江临海317000 江苏省肿瘤医院胸外科 江苏南京210000 阜外医院临床心血管药理中心 北京100037