摘要：目的：制备一种新型的双功能化胶体金纳米探针,并考察其特异性。方法：选择二硫化物分子和甲型流感病毒（H1N1亚型）HA基因中特异性的23 mer寡核苷酸片段组装到胶体金颗粒表面,制成双功能化胶体金纳米探针（识别探针,颜色呈酒红色）;利用磁性微球作为固相支持物,偶联另一段特异性H1N1寡核苷酸片段制成捕捉探针;两者与靶DNA（完全匹配DNA）结合,形成无色的捕捉探针-靶DNA-识别探针（＂三明治＂夹心式复合物）,并采用基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱（MALDI TOF MS）测定。同时,在选择向体系中分别加入超纯水（作为空白对照）、完全匹配DNA、不完全匹配DNA及2条仅有1个碱基错配的DN段作为靶目标进行实验,观察体系颜色变化及质谱测定,考察探针的特异性。结果：捕捉探针和识别探针只能与完全匹配DNA结合,形成夹心式复合物,反应体系颜色由酒红色转变为无色,充分洗涤后加热去杂交,则由无色复呈酒红色,质谱检测出现信号（m/z 693）;而其他靶目标（不完全匹配DNA及2条仅有1个碱基错配的DN段）和空白对照实验,不能与2种探针形成夹心式复合物,反应体系均没有颜色变化（仍呈现酒红色）,充分洗涤后体系呈无色,加热去杂交体系仍呈无色,质谱检测未见信号（m/z 693）。这说明胶体金纳米探针的特异性很高,可区分仅有1个碱基错配的靶目标。结论：本研究建立了一种新型的自组装双功能化胶体金纳米探针,其制备过程简单、特异性很高。此类型胶体金纳米探针在核酸分析,尤其是疾病早期诊断,寡核苷酸多态性分型等方面将有广泛的应用前景。

关键词：核酸探针 胶体金 磁力学 微球体 光谱法 

单位：南京大学医学院 江苏南京210093