摘要：目的：构建COL1A1特异小干扰RNA（siRNA）表达载体,体外评价其对胃癌细胞BGC-823增殖迁移的影响。方法：根据文献获得3个COL1A1的siRNA靶序列,设计能转录短发夹状RNA（short hairpin RNAs,shRNA）的DNA序列,并与pSilencerTM4.1-CMV neo线性质粒载体连接,连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α,筛选获得重组质粒;经DNA测序鉴定重组体DNA序列正确后转染胃癌BGC-823细胞,利用G418筛选稳定表达COL1A1-shRNA的BGC-823细胞株。通过实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测转染后细胞COL1A1在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法及Transwell法检测COL1A1干扰后胃癌细胞增殖及迁移能力的变化。结果：序列测定表明成功构建3个COL1A1-shRNA表达载体。实时荧光定量RT-PCR及Western blot检测显示,COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞的COL1A1 mRNA及蛋白表达水平明显降低（P〈0.05）;MTT试验及Transwell迁移试验显示,转染后细胞增殖及迁移能力明显降低（P〈0.05）。结论：COL1A1-shRNA转染胃癌BGC-823细胞能有效抑制细胞COL1A1的表达及癌细胞的增殖迁移。

关键词：rna干扰 受体 转录 遗传 遗传载体 

单位：浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室 浙江杭州310016 浙江大学医学院疾病模拟中心 浙江杭州310058