摘要：目的：研究人CYP3A4与POR和cytb5用悬浮细胞共表达时的最佳条件。方法：悬浮培养Sf9细胞，分别摸索摇床的温度、转速、摇瓶中细胞液的量、表面活性剂的加量、细胞的培养时间，以及3种病毒的加量比例等条件，并进行优化；然后，将表达产物制成微粒体后用于睾酮的代谢，并分别测其代谢活性。结果：当恒温摇床的温度为27℃，转速为90r／min，每250ml摇瓶中加入80～120ml细胞密度为5×10^5个／ml的细胞液，并加入0．1％的Pluronic F．68，细胞培养72h时，最适合细胞的生长和目的蛋白的表达。此时，当3种病毒的加量比例为1：l：1时，表达条件最佳，其对底物睾酮代谢的Km值、Vmax和CLint分别为119．6μmol／L、0．52μmol／（min·g蛋白）和4．34ml／（min·g蛋白）。结论：通过三重共表达CYP3A4、POR、cytb5，以及对表达条件的优化，提高了目的蛋白的表达量，得到了较高代谢活性的CYP3A4，从而为新药代谢及药物一药物相互作用研究奠定了基础，为药物代谢酶的大量表达提供了可行的方案。

关键词：细胞色素b5类 细胞色素p450酶系统 氧化还原酶类 药物相互作用 药物设计 

单位：浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所; 浙江杭州310058