摘要:目的:研究含有Toll/interleukin 1 receptor结构域的蛋白(TcpC)对巨噬细胞凋亡的影响,探讨TcpC诱导巨噬细胞凋亡的分子机制.方法:通过Transwell将分泌TcpC的尿路致病大肠埃希菌CFT073野生株(TcpCwt)和敲除tcpc基因的CFT073突变株(TcpC mut)与小鼠巨噬细胞系J774A隔开共培养,Annexin V/PI双染法观察不同数量和不同处理时间的TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞凋亡的影响;活性氧染色观察不同处理时间的TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞内活性氧水平的影响,Annexin V/PI双染法观察不同浓度N-乙酰半胱氨酸清除活性氧后TcpCwt和TcpCmut对J774A细胞凋亡的影响,Western blot法检测0.1 mmol N-乙酰半胱氨酸处理前后与TcpCwt和TcpCmut共培养的J774A细胞内caspase-3表达.结果:与对照组和TepC mut组相比,TcpCwt在细菌数量为5 ×10^5和5×10^6以及处理时间为24 h和36 h时均可显著促进J774A凋亡(均P<0.01).共培养24 h和36 h的TcpCwt组J774A细胞内活性氧水平显著高于对照组和TcpC mut组(均P<0.01).0.1 mmol和1 mmol N-乙酰半胱氨酸处理可显著抑制TcpCwt对J774A细胞的促凋亡作用(均P<0.01).TcpCwt处理可显著降低J774A细胞内总caspase-3表达,而N-乙酰半胱氨酸处理可抑制与TcpCwt共培养的J774A细胞内caspase-3裂解,提高总caspase-3表达水平.结论:TcpC可促进巨噬细胞内活性氧产生,进而介导巨噬细胞凋亡.
关键词:肠致病性大肠杆菌 巨噬细胞 活性氧 细胞凋亡 小鼠
单位:浙江大学城市学院医学院; 浙江杭州310015
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