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应用大鼠血清建立体外软骨细胞退变模型

王小军; 张浩; 詹红生; 丁道芳 浙江大学学报·医学版 2015年第03期

摘要:目的:应用大鼠血清建立大鼠体外软骨细胞退变模型。方法:取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取原代细胞进行实验。软骨细胞分别用含10%胎牛血清的DMEM (对照组)、含50 ng/mL 白细胞介素( IL )-1β+10%胎牛血清的 DMEM ( IL-1β组)、含2.5%大鼠血清的DMEM(2.5%血清组)及含5.0%大鼠血清的DMEM(5.0%血清组)中培养。培养24 h后,观察细胞形态变化,MTT法检测各组细胞的增殖情况,蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原的表达和Ⅱ型胶原及MMP-13的表达,实时定量PCR检测退变相关基因ADAMTS5、MMP-9、Aggrecan和SOX-9的表达。结果:两血清组和IL-1β组的软骨形态均由原来的多角形变成长梭形,且两血清组和IL-1β组均促进软骨细胞的增殖,下调转录因子SOX-9和上调基质降解酶MMP-13、MMP-9、ADAMTS5的表达。结论:大鼠血清具有促进软骨退变的作用,可用于建立体外软骨退变模型。

关键词:软骨细胞大鼠wistar血清细胞增殖

单位:浙江中医药大学附属湖州市中医院骨科; 浙江湖州313000; 上海中医药大学附属曙光医院石氏伤科医学中心; 上海201203

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