摘要:目的:研究微小RNA(miRNA)-29b对乳腺癌细胞增殖和迁移的影响及其分子生物学机制。方法:构建miRNA-29b重组慢病毒表达载体lenti-miRNA-2:9b转染293T细胞获得重组慢病毒,提纯慢病毒颗粒感染乳腺癌细胞MCF-7。通过绿色荧光蛋白肿瘤细胞比例来验证转染情况;实时定量PCR检测miRNA-29b的表达水平;CCK-8实验和Transwell实验检测miRNA-29b过表达后乳腺癌细胞生物学行为的变化。采用生物信息学软件对miRNA-29b调控的下游靶基因进行预测和筛选,使用双荧光素酶检测、实时定量PCR和蛋白质印迹法进行验证。对筛选出的miRNA-29b调控的下游靶基因RTKN通过siRNA-RTKN验证其对MCF-7细胞的增殖和迁移的影响。结果:成功构建了miRNA-29b的重组慢病毒表达载体。感染乳腺癌细胞McF-7后.1enti.miRNA.29b组和空载体转染组分别有90%和60%左右的细胞出现绿色荧光;lenti.miRNA-29b组miRNA-2,9b表达量较空载体转染组和空白对照组显著增加(均P〈0.05)。MCF-7细胞的增殖和迁移能力较空载体转染组显著减弱(均P〈0.05)。RTKN的基因编码3'UTR区中具有miRNA-29b的结合位点;野生型RTKN-WT.3’UTR报告基因载体与lenti-miRNA-29b共转染MCF-7细胞后可使荧光素酶的活性显著下降(P〈0.05)。转染siRNA-RTKN后,MCF-7细胞中RTKN蛋白的水平显著下降。细胞增殖和迁移能力显著减弱(均P〈0.05)。结论:miRNA-29b能够通过抑制RTKN的表达来抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。
关键词:微rnas 慢病毒属 转染 聚合酶链反应 细
单位:南京医科大学金陵临床医学院; 江苏南京210002; 杭州师范大学医学院附属杭州市萧山区第一人民医院肿瘤中心; 浙江杭州311200; 浙江中医药大学附属第一医院肿瘤科; 浙江杭州310006
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