摘要：目的:探讨等温链置换扩增结合纳米金测流层析试纸条用于登革热病毒(DENV)快速检测的可行性。方法:采用磁珠富集法提取病毒总RNA,并逆转录为cDNA用于等温链置换扩增检测体系;等温链置换扩增用于检测DENV,琼脂糖凝胶电泳用于分析等温链置换扩增产物及其检测的敏感度;采用柠檬酸三钠还原法制备用于试纸条的纳米金颗粒;利用核酸碱基互补配对原理设计纳米金测流层析试纸条的检测线与控制线,建立DENV的检测体系。结果:等温链置换扩增的敏感度为10fmol/L。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的敏感度也为10fmol/L,取其检测样品浓度的对数值进行线性分析,检测浓度范围为10~10^12fmol/L,符合线性回归方程,线性相关系数(R^2)为0.98。基于等温链置换扩增的纳米金测流层析试纸条检测DENV的特异性较高,与其他对照组无交叉。结论:建立了基于等温链置换扩增反应的纳米金试纸条用于DENV的检测方法,检测结果肉眼可见,敏感度高,可用于DENV的快速检测。

关键词：dna引物 序列分析 核酸扩增技术 纳米技术 生物技术 

单位：贵州医科大学基础医学院免疫教研室组织工程与干细胞实验中心; 贵州贵阳550004; 贵州医科大学海外教育学院; 贵州贵阳550004; 中国科学院广州生物与医药健康研究院干细胞与分子诊断室; 广东广州510530