摘要：目的:研究不同浓度雌二醇(estradiol,E2)对人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stromal cells,HAMSCs)体外培养中增殖、凋亡的影响。方法:采用改良酶消化法提取HAMSCs,流式细胞学方法和免疫荧光法鉴定提取细胞。HAMSCs培养方法分为对照组和E2组(分别加入浓度为10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L E2)。CCK-8检测各组HAMSCs增殖情况;q RT-PCR检测干细胞特异基因Oct-4和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果:CCK-8检测显示各浓度E2组和对照组的HAMSCs增殖活性在1~6 d都随时间的变化而变化(F时间=2 418,132,P时间=0,000);各浓度E2组在1~4 d的增殖率与对照组无明显差异;4 d后,各浓度E2组的增殖率明显高于对照组(F组别=246.601,P组别=0.000),各浓度组间无明显差异。q RT-PCR检测显示10-6 mol/L E2组(1.00±0.10)的Oct-4 m RNA表达水平较对照组(0.58±0.16)和其他E2浓度组(1.31±0.22、0.81±0.04、0.78±0.07)上调(P=0.000,P=0.020,P=0.001,P=0.000);除10-6 mol/L E2组(0.83±0.47,P=0.084)外,其他E2浓度组(0.49±0.25、0.38±0.19、0.32±0.10)抗凋亡基因Bcl-2基因表达量均较对照组(1.06±0.13)下调(P=0.038,P=0.015,P=0.010)。10-5 mol/L E2组(2.20±0.58)的Bax基因较对照组、其他E2浓度组(1.00±0.05、1.52±0.38、1.38±0.17、1.17±0.19)上调(P=0.001,P=0.028,P=0.012,P=0.003)。Western blot检测提示10-5 mol/L E2组(0.514±0.014)的促凋亡蛋白表达Bax较对照组(0.201±0.017)明显上调(P=0.000),而抗凋亡蛋白Bcl-2(0.366±0.024)与对照组(0.215±0.080)之间差异无统计学意义(P=0.055)。而10-6 mol/L E2组(0.378±0.016)的促凋亡蛋白Bax较其他浓度E2组(0.514±0.014、0.547±0.036、0.577±0.028)表达降低(P=0.000)。结论:E2促进HAMSCs的增殖呈时间依赖性,高浓度E2(10-5 mol/L)促进HAMSCs凋亡,较高浓度E2(10-6 mol/L)维持HAMSCs活性并保护其分化潜能。

关键词：间充质干细胞 雌二醇 增殖 凋亡 

单位：重庆医科大学附属大学城医院妇产科; 重庆401331