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人肺腺癌中癌相关成纤维细胞的分离培养与初步分析

孙世杰; 田雷; 李丹; 刘先俊; 卜友泉 重庆医科大学学报 2019年第07期

摘要:目的:分离鉴定人肺腺癌组织中的癌相关成纤维细胞(cancer-associataed fibroblasts,CAFs),分析CAFs对肺癌细胞增殖和迁移能力的影响,为进一步探索CAFs在肺癌发生发展中的作用及机制奠定基础。方法:获取人肺腺癌患者手术样本,分离并培养癌组织中的成纤维细胞。采用相差显微镜观察细胞形态,采用间接免疫荧光实验分析关键分子标志物的表达。采用CCK-8法检测细胞增殖,采用流式细胞仪分析细胞周期;采用Transwell实验分析细胞迁移能力。采用共培养和制备条件培养基方法分析CAFs对肺腺癌细胞A549增殖和迁移能力的影响。采用qRT-PCR检测关键基因表达的变化。结果:从人肺腺癌新鲜组织中分离获得CAFs,其形态为长梭形,表达纤粘蛋白和波形蛋白等成纤维细胞标志物,不表达上皮细胞角蛋白8/18(CK8/18)等上皮细胞标志物。肺腺癌CAFs增殖活跃。肺腺癌CAFs能明显促进A549的增殖和迁移能力,并明显上调A549细胞中c-Myc、PIM1、SOCS3和CCND1基因的表达。结论:成功分离了人肺腺癌CAFs,其能明显促进肺癌细胞的增殖和迁移能力。

关键词:肺癌成纤维细胞癌相关成纤维细胞原代培养

单位:重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室; 重庆400016; 重庆医科大学附属第一医院胸外科; 重庆400016; 重庆医科大学基础医学院病理学教研室; 重庆400016

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