摘要:目的确立人趋化因子SLC在大肠杆菌中的表达条件和初步纯化条件。方法将pET32a(+)/SLC分别转化大肠杆菌AD494(DE3)、BL21trxB(DE3)、BL21trxB(DE3)plusS.选择最佳宿主菌,优化诱导表达的条件,将大量表达的目的蛋白经金属离子亲和层析、除盐、肠激酶酶切、阳离子交换进行初步纯化。结果pET32a(+),SLC最佳宿主菌为BI。21trxB(DE3).优化的表达条件为37C、1mmol/LIPTG诱导3h,SDS-PAGE分析可见,表达蛋白的大小约为30kd,占菌体总蛋白的50%以上.可溶性蛋白约占50%。用SLC多克隆抗体进行Westernblm分析显示,在30kd处出现单一阳性条带,而对照的pET32a(+)/BL21trxB(DE3)诱导菌则无此反应。SLC经一系列纯化步骤得到初步纯化。结论初步建立pET32a(+)/SLC在宿主菌BL21trxB(DE3)中表达和纯化的方法。
关键词:融合蛋白 宿主菌 蛋白纯化 趋化因子 大肠杆菌
单位:第三军医大学新桥医院检验科; 重庆400037; 西南医院综合实验研究中心; 重庆400038
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