摘要:目的 观察α-晶体蛋白(α-crystallin)在过氧化氢(H2O2)损伤大鼠视网膜神经节细胞(retina ganglion cells,RGCs)中的影响并探讨其机制.方法 原代培养大鼠RGCs并用Thy1.1鉴定,α-crystallin组加入α-晶体蛋白(10^-4、10^-5、10^-6g/L)预处理2h,然后加入H2O2(终浓度为0.5mmol/L)进行损伤实验,观察3、12、24h细胞形态学变化、轴突长度和突起数目的变化及细胞凋亡发生,检测RGCs培养上清液中相关酶(超氧化物歧化酶/SOD、谷胱甘肽过氧化物酶/GSH Px和过氧化氢酶/CAT、乳酸脱氢酶/LDH)活性及丙二醛/MDA水平的变化.Fluo-3/AM荧光比值成像技术测定RGCs胞浆游离钙离子水平.结果 单纯损伤组RGCs存活率与SOD、CAT、GSH Px活性随损伤时间延长显著降低,LDH活性和MDA含量升高;α-crystallin组RGCs存活率与SOD、CAT、GSH Px活性升高,LDH、MDA生成减少,其变化呈浓度依赖性.α-crystallin组RGCs突起断裂程度明显少于单纯损伤组.单纯损伤组24h DNA电泳出现明显凋亡梯形带,α-crystallin低浓度组出现较弱凋亡带.单纯损伤组RGCs钙离子荧光强度急剧升高,12h达平台期.α-crystallin组钙离子变化随α-crystallin浓度增高而减弱.结论 α-晶体蛋白能够减轻H2O2介导的RGCs自由基损伤效应,其机制与抑制RGCs钙离子内流、升高RGCs抗氧化酶活性有关.
关键词:rgcs 过氧化损伤
单位:第三军医大学西南医院眼科; 重庆400038
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