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VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒的构建

司英健; 张曦; 陈幸华; 刘耀; 高蕾; 高力; 张诚; 彭贤贵; 王庆余 重庆医学 2007年第17期

摘要:目的构建VCAM-1和EGFP双基因共表达重组腺病毒载体。方法采用DNA重组技术,将目的基因VCAM-1克隆至含有报告基因EGFP的穿梭质粒;在BJ5183细胞中与pAdeasy-l质粒进行同源重组,产生重组腺病毒载体。结果(1)VCAM-1基因与pAdTrack-CMV载体成功连接,经NotⅠ/XhoⅠ双酶切后电泳可见2个大小约为9kb和2kb左右条带,经PCR法扩增后电泳可见一个600bp左右条带,证明pAdTrack-CMV-VCAM-1重组质粒构建成功;(2)pAdTrack-CMV-VCAM-1质粒与pAdeasy-l质粒同源重组后,产物经PacⅠ酶切后电泳可观察到2个大小约为31kb和4kb左右条带,与预期结果相符。结论Ad-VCAM-1-EGFP重组腺病毒载体构建成功。

关键词:egfp重组腺病毒载体构建

单位:第三军医大学新桥医院血液内科、重庆市医学重点学科; 重庆400037

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