摘要：目的探讨人脐带血CD34^＋细胞提取以及慢病毒转染的方法。方法脐带血20袋，采用直接梯度离心法，或6％羟乙基淀粉沉淀加梯度离心法收集单个核细胞，检测CD34^＋阳性率，经MACS磁珠分离获得CD34^＋细胞，分为完全培养基组、增强感染剂（ENis）组，过夜培养，每组按MOI 1：1、1：10、1：50加入带GFP标记的慢病毒载体进行转染，每小组再分组分别加入0、1、5ng／mL polybrene，转染后36～48h，3、5、7d分别在荧光显微镜下观察转染情况。结果直接梯度法获得的单个核细胞中红细胞含量高，CD34^＋阳性率为0．8％VS1．2％，MACS分离获得CD34^＋细胞阳性率达84．6％以上。转染后观察增强感染剂组感染率低于完全培养基组，以MOI 1：50组荧光最强，但细胞死亡较多，加入5ng／mL polybrene组细胞大片快速裂解死亡，荧光持续时间短，以MOI1：10结合1ng／mL polybrene组阳性率高且荧光表达持续时间长。结论MOI1：10结合1ng／mL polybrene可能是慢病毒转染较理想的方法。

关键词：细胞 慢病毒载体 基因转染 

单位：第三军医大学西南医院妇产科 重庆400038 第三军医大学临床血液教研室 重庆400038