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人外周血富集白细胞层来源的树突状细胞的培养与鉴定

史蓉华 范娅涵 赵树铭 重庆医学 2009年第10期

摘要:目的探讨从人外周血富集白细胞层(白膜)分离、培养树突状细胞(dendritic cell,Dc)的方法。方法用PBS液与白膜1:1稀释,采用Ficoll淋巴细胞分离液对稀释后的白膜进行淋巴细胞分离,2h后弃悬浮细胞,加入重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)和DMEM完全培养液培养,体外培养第6天,加入肿瘤坏死因子(TNF-α),促进其分化成熟。用流式细胞仪(flow cytometer,FCM)检测细胞表型。在倒置显微镜下观察细胞形态。结果显微镜下观察,细胞呈不规则形状,膜表面向外伸出许多树枝样细长突起;成熟DC细胞表面CD83、CD86、CD1a、HLA—DR分子表达明显增高;平均每份白膜(200mL全血)可以获得(3.87±0.31)×10^7个成熟DC。结论作者建立了一种从白膜中分离、培养树突状细胞的方法,可获得数量较多、纯度较高的DC,为DC瘤苗的来源开创了一条新途径,并为血液的合理利用找到了一个新方式。

关键词:树突细胞人外周血富集白细胞层细胞培养

单位:第三军医大学西南医院输血科 重庆400038

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